การสร้างและผลิตรีคอมบิแนนท์แอนติบอดีที่มีความจำเพาะกับโปรตีนของ Fasciola gigantica ในเซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม เพื่อพัฒนาชุดตรวจ

Abstract

Glutathione peroxidases (GPx) เป็นเอนไซม์ต้านอนุมูลอิสระที่สำคัญที่พยาธิ Fasciola spp. หลั่งออกมาเพื่อใช้ในการหลบหลีกและปกป้องตัวเองจากระบบภูมิคุ้มกันของผู้ติดเชื้อ ในการศึกษานี้สร้างแอนติบอดีชนิด monoclonal antibody (MoAb) ชื่อว่า 7B8 จากหนูต่อโปรตีน glutathione peroxidase จากพยาธิ F. gigantica (rFgGPx) โดยการฉีดโปรตีน rFgGPx เข้าสู่บริเวณ subcutaneous ในหนูสายพันธุ์ BALB/c เพื่อให้หนูสร้างแอนติบอดีที่จำเพาะต่อ rFgGPx ด้วยเทคนิค hybridma จากเซลล์ที่เก็บจากม้ามของหนู แอนติบอดีที่สร้างขึ้นเป็นชนิด IgG1 ประกอบไปด้วย κ light chains เมื่อนำมาทำปฎิกิริยากับ rFgGPx ด้วยวิธี immunoblotting พบว่าสามารถจับได้อย่างจำเพาะที่ขนาด 19 kDa และเมื่อทดสอบความจำเพาะด้วยวิธี indirect ELISA กับ native FgGPx โปรตีนพบว่าสามารถทำปฎิกิริยากับ whole body (WB), metacercariae, newly excysted juveniles (NEJs), 4 week-old juveniles และ adult F. gigantica แต่ไม่ทาปฎิกิริยากับโปรตีนจากพยาธิโตเต็มวัยชนิดอื่นประกอบด้วย Fischoederius cobboldi, Paramphistomum cervi, Setaria labiato-papillosa, Eurytrema pancreaticum, Gastrothylax crumenifer และ Gigantocotyle explanatum จากนั้นนำ MoAb ต่อ rFgGPx ไปย้อมด้วยวิธี immunolocalization กับพยาธิ F. gigantica ตัวเต็มวัยพบว่าเกิดปฎิกิริยาการจับอย่างจำเพาะที่บริเวณ tegument, vitelline cells และ egg นอกจากนี้เมื่อนำ serum จากเลือดหนูที่ติดเชื้อ F. gigantica มาทดสอบด้วยวิธี ELISA พบว่าให้ผลเป็นบวกจากผลการทดสอบแสดงให้เห็นว่าโปรตีน FgGPx มีการหลั่งออกมาในบริมาณมากโดยเฉพาะที่บริเวณ tegumental antigens (TA) ดังนั้น MoAb ต่อ rFgGPx จึงอาจนำไปใช้เพื่อวินิฉัยโรคโดยวิธี immunodiagnosis ในโรค fasciolosis ในมนุษย์และสัตว์