การแยกสกัดเชื้อ Pineapple mealybug wilt-associated virus -2 ค่อนข้าง บริสุทธิ์และการผลิตโพลีโคลนอลแอนติซีรัมในหนูเม้าส์พันธุ์ BALB/cMlac

Abstract

แยกสกัดเชื้อ Pineapple mealybug wilt associated virus-2 (PMWaV-2) จากส่วนที่ เป็นสีขาวของใบสับปะรดที่ติดเชื้อ PMWaV-2 ด้วยวิธี partial purification ตามวิธีการของ Gunasinghe และ German (1989) ตรวจสอบเชื้อ PMWaV-2 ใ นสารละลายด้วยวิธี Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) โ ดยใช้คู่ไพรเมอร์ที่จำเพาะต่อยีน Heat shock protein homologous (HSP70) ของเชื้อ PMWaV-2 ซึ่งจะให้แถบดีเอ็นเอขนาดประมาณ 610 คู่เบส จากนั้นนำสารละลายไวรัสมาเตรียมเป็นแอนติเจนโดยผสมกับ Freund’s complete adjuvant อัตราส่วน 1:1 (ปริมาตรต่อปริมาตร) และฉีดเข้าหน้าท้อง (Intraperitoneal injection, IP) หนูเม้าส์สายพันธุ์ BALB/cMlac จำนวน 2 ตัว ใ นครั้งแรก หลังจากนั้น 1 สัปดาห์ ฉีดเชื้อ PMWaV-2 ผสมกับ Freund’s incomplete adjuvant อีก 3 ครั้ง แต่ละครั้งห่างกัน 1 สัปดาห์ เก็บ เลือดจากหางหนูในสัปดาห์ที่ 5 หลังการฉีดครั้งแรก ตรวจหาค่าไตเตอร์ของโพลีโคลนอลแอนติซีรัมที่ ผลิตได้จากหนูเม้าส์ตัวที่ 1 และ 2 โดยใช้น้ำคั้นใบสับปะรดติดเชื้อ PMWaV-2 ด้วยวิธี indirect PTAELISA พบว่ามีค่าไตเตอร์ เท่ากับ 1: 12,800 และ1:25,600 ตามลำดับ