การหาจุลินทรียใต้ทะเลลึกที่สามารถผลิตเอนไซม์กลุ่มไฮโดรเลสชอบอุณหภูมิสูง และมีความเสถียรในตัวทำละลายอินทรีย์ เพื่อนำมาประยุกต์ใช้เป็นแหล่งผลิตตัวเร่งปฏิกิริยาทางชีวภาพชนิดใหม่

จิตติมา เจริญพานิช

การหาจุลินทรียใต้ทะเลลึกที่สามารถผลิตเอนไซม์กลุ่มไฮโดรเลสชอบอุณหภูมิสูง และมีความเสถียรในตัวทำละลายอินทรีย์ เพื่อนำมาประยุกต์ใช้เป็นแหล่งผลิตตัวเร่งปฏิกิริยาทางชีวภาพชนิดใหม่

dc.contributor.author	จิตติมา เจริญพานิช
dc.contributor.other	มหาวิทยาลัยบูรพา. คณะวิทยาศาสตร์
dc.date.accessioned	2019-03-25T09:07:15Z
dc.date.available	2019-03-25T09:07:15Z
dc.date.issued	2557
dc.identifier.uri	http://dspace.lib.buu.ac.th/xmlui/handle/1234567890/1589
dc.description.abstract	ความต้องการใช้เอนไซมโปรติเอสที่มีสมบัติเฉพาะที่เพิ่มขึ้นในตลาดส่งผลให้ นักเทคโนโลยีชีวภาพสนใจที่จะหาแหล่งผลิตเอนไซม ์โปรติเอสชนิดใหม่ที่มีสมบัติตามต องการ แบคทีเรียใต้ ทะเลซึ่งอาศัยอยู่ในสภาวะที่มีความหลากหลายทางชีวภาพและมีการเปลี่ยนแปลงทางสภาพแวดล ้อมตลอดเวลาจึงเป็นแหล่งผลิต เอนไซม์ แหล่งหนึ่งที่น่าสนใจ โครงการวิจัยนี้มีเป้าหมายที่จะหาแบคทีเรียใต้ ทะเลที่สามารถขับเอนไซม โปรติเอสศักยภาพสูงออกมานอกเซลล์ได้ จาก แบคทีเรียใต้ ทะเลจำนวน 12 ไอโซเลทที่คัดแยกได้ จากตะกอนทะเลของเกาะจาน แสมสาร ที่ระดับความลึก 9 และ 24 เมตร พบจำนวน 3 ไอโซเลทที่สามารถผลิตเอนไซม โปรติเอสได โดยพบการผลิตเอนไซม โปรติ-เอสสูงที่สุด (6.57 ± 0.25 หน่วยต่อมิลลิลิตร) ในแบคทีเรียใต้ ทะเลไอโซเลทที่ 7 ซึ่งมีการระบุชนิดว่าเป็น Bacillus megaterium โดยสามารถวัดแอคติวิตีของเอนไซม์ โปรติเอสในอาหารเลี้ยงเชื้อได้ สูงที่สุดหลังจากการบ่มเพาะเชื้อเป็นเวลา 15 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 30°C และค่าพีเอชเท่ากับ 6.0 ที่ความเร็วในการเขย่า 250 รอบต่อนาที เมื่อทำบริสุทธิ์บางส่วนเอนไซม ์โปรติเอสโดยการตกตะกอนเกลือแอมโมเนียมซัลเฟตที่ความเข้ มข้ นเกลืออิ่มตัวร ้อยละ 60-80 และการไดอะไลซิส พบเอนไซม ์มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 125 เท่า โดยมีมวลโมเลกุลสัมพัทธ์ ประมาณ 61 กิโลดาลตัน เมื่อทำปฏิกิริยากับสับสเตรทอะโซเคซีนพบสภาวะที่เหมาะสมของเอนไซม ์คือ ค่าพีเอชเท่ากับ 8.0 และอุณหภูมิเท่ากับ 37°C เอนไซม์ มีความเสถียรในช่วงค่าพีเอชเป็นด่าง (ค่าพีเอช 7.0-9.0) เป็นเวลา 6 ชั่วโมง และที่อุณหภูมิสูงหลากหลายระหว่าง 60 และ 80°C เป็นเวลา 72 ชั่วโมง นอกจากนี้ยังพบว่าเกลือของโลหะไม่ส่งผลยับยั้งการทำปฏิกิริยาของเอนไซม์ แต่กับเสริมแอคติวิตี และเอนไซม ์ยังมีความเสถียรในสภาวะที่มีสารลดแรงตึงผิวสารฟอกขาว และตัวทำละลายอินทรีย ที่ไม่มีขั้ว ความเสถียรต่ออุณหภูมิสูง การชอบทำปฏิกิริยาในสภาวะที่เป็นด่างและความสามารถในการทำปฏิกิริยาในสภาวะที่มีเกลือของโลหะ ตัวทำละลายอินทรีย ์สารลดแรงตึงผิว และสารซักฟอก สนับสนุนให้ เห็นถึงศักยภาพของเอนไซม โปรติเอสชนิดนี้ในการนำมาเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาทางชีวภาพที่มีประสิทธิภาพสำหรับประยุกต์ ใช้ ในระดับอุตสาหกรรมต่อไป	th_TH
dc.description.sponsorship	ได้รับทุนสนับสนุนการวิจัยงบประมาณภายใต้ โครงการส่งเสริมการวิจัยในสถาบันอุดมศึกษา มหาวิทยาลัยบูรพา ประจำปีงบประมาณ 2557	en
dc.language.iso	th	th_TH
dc.publisher	คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยบูรพา	th_TH
dc.subject	แบคทีเรียใต้ทะเล	th_TH
dc.subject	เอนไซม โปรติเอส	th_TH
dc.subject	สาขาเกษตรศาสตร์และชีววิทยา	th_TH
dc.title	การหาจุลินทรียใต้ทะเลลึกที่สามารถผลิตเอนไซม์กลุ่มไฮโดรเลสชอบอุณหภูมิสูง และมีความเสถียรในตัวทำละลายอินทรีย์ เพื่อนำมาประยุกต์ใช้เป็นแหล่งผลิตตัวเร่งปฏิกิริยาทางชีวภาพชนิดใหม่	th_TH
dc.title.alternative	Screening of deep-sea microorganisms producing thermophilic and solvent stable hydrolytic enzymes as novel sources of biocatalyst production.	en
dc.type	Research
dc.author.email	jittima@buu.ac.th
dc.year	2557
dc.description.abstractalternative	Increasing demand of protease with specific properties lead biotechnologists explore a new source of protease. Marine bacterium living in wide biological diversity and environmental change is one of the popular sources for biotechnologists. This study aims to find a marine bacterium secrete high potent protease. Among 12 marine bacteria isolated from marine sediments of Koh Chan, Samaesan (9 and 24 meters depth), three were found to produce protease. Isolate No.7 showed the highest protease activity (6.57 ± 0.25 U/ml) and was identified as Bacillus megaterium. Maximum protease activity of the culture medium was obtained after 15 h at 30°C and pH 6.0, 250 rpm. The protease was successfully purified 125-fold by 60-80% ammonium sulphate precipitation and dialysis. The purified protease possessed a relative molecular mass of 61 kDa. Higher protease activity was determined at pH 8.0 and 37 °C with azocasein as a substrate. The enzymes was stable at alkali pH (7.0-9.0) for 6 h and at a variety of high temperature between 60 and 80 °C for 72 h. Metal ions did not affect the enzyme activity in contrast improve the activity. The enzyme was stable in surfactants, bleaching agents and hydrophobic solvents. The high temperature stability, alkaliphilic and ability to work in metal ions, solvents, surfactants and bleachining agents support the potential of this protease as a vigorous biocatalyst for industrial applications	en